In vitro propagation of black bamboo [Phyllostachys nigra (Lodd. Ex. Lindl.) Munro] via callus culture

Abstract

In vitro propagation of black bamboo [Phyllostachys nigra (Lodd. Ex. Lindl.) Munro] was carried out. Surface-sterilized lateral buds from nodes were cultured for 14 days on Murashige and Skoog (MS) medium added with different concentrations of Thidiazuron (TDZ) alone or in combination with 6-benzyladenine (BA). It was found that MS medium supplemented with 0.2 mg/L Thidiazuron induced the highest numbers of shoots (2.8 shoots with 1.3 cm long). Furthermore, when 5% coconut water was added, the numbers of shoot was up to 6.4 shoots with 1.5 cm long. Callus induction was induced on MS medium with supplemented in 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) alone at different concentrations (0.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 mg/L) or 2,4-D (3.0, 4.0, 5.0 mg/L) in combination with BA (3.0, 2.0, 1.0 mg/L) or 2,4-D (3.0, 4.0, 5.0 mg/L) added with BA (3.0, 2.0, 1.0 mg/L) and IBA (0.5 mg/L). Callus was induced on MS medium with 2,4-D 5.0 mg/L and BA 1.0 mg/L. They were friable calli with containing white to yellow. Callus Proliferation was high on MS medium added with 2,4-D 5.0 mg/L. This medium induced embryogenic calli and some part of callus showed brown-black color. Shoot induction was induced on MS medium with BA 1.0 mg/L added with NAA 0.5 mg/L and 2,4-D 0.5 mg/L, in 45 days. Roots were induced from obtained shoot clumps by culturing on ½MS added with 1-Naphthalene acetic acid (NAA), 3-indole butyric acid (IBA) or 1-indole acetic acid (IAA) for 3 months. The highest percentage of rooted shoot clumps was 20% on ½MS medium added with 3.0 mg/L NAA providing 3.0 roots per shoot.

การขยายพันธุ์ไผ่ดำ [Phyllostachys nigra (Lodd. Ex. Lindl.) Munro] ในหลอดทดลองโดยการนำตาข้างจากข้อที่ผ่านการฟอกฆ่าเชื้อที่ผิวมาเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 14 วัน บนอาหารสูตร Murashige & Skoog (MS) ที่เติม Thidiazuron (TDZ) เพียงชนิดเดียว หรือร่วมกับ 6-benzyladenine (BA) ที่ความเข้มข้นต่าง ๆ พบว่าอาหารที่เติม TDZ ความเข้มข้น 0.2 มิลลิกรัมต่อลิตร สามารถชักนำให้เกิดยอดได้มากที่สุด 2.8 ยอด มีความยาวยอด 1.3 เซนติเมตร และเมื่อเติมน้ำมะพร้าว 5 เปอร์เซ็นต์ ในอาหารเพาะเลี้ยงสามารถชักนำให้เกิดยอดได้มากขึ้นถึง 6.4 ยอด โดยมีความยาวยอดเฉลี่ย 1.5 เซนติเมตร เมื่อนำยอดที่ได้จากข้อมาชักนำให้เกิดแคลลัสบนอาหารสูตร MS ที่เติม 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) ความเข้มข้น 0.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 มิลลิกรัมต่อลิตร หรือ 2,4-D (3.0, 4.0, 5.0) ร่วมกับ BA (3.0, 2.0, 1.0) หรือ 2,4-D (3.0, 4.0, 5.0) ร่วมกับ BA (3.0, 2.0, 1.0) และ IBA (0.5) พบว่าสูตรอาหารที่สามารถชักนำให้เกิดแคลลัสได้ดีที่สุดคือสูตรที่เติม 2,4-D 5.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ BA 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร โดยชักนำให้เกิดแคลลัสจากยอดได้ 100 เปอร์เซ็นต์ แคลลัสที่เกิดมีลักษณะเกาะตัวกันหลวมๆ มีสีขาวปนเหลืองและอาหารที่สามารถทำให้แคลลัสขยายตัวเพิ่มขึ้น คือ อาหารสูตร MS ที่เติม 2,4-D 5.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ลักษณะแคลลัสมีสีขาวปนเหลือง ทั้งนี้พบการเกิด embryogenic callus ในสูตรอาหารนี้ สำหรับการชักนำให้เกิดยอดจากกลุ่มแคลลัสพบว่า เมื่อใช้ BA 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ NAA 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร และ 2,4-D 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร สามารถชักนำให้เกิดยอดจากกลุ่มแคลลัสได้ 60 เปอร์เซ็นต์ ในระยะเวลา 45 วัน จำนวนยอดเฉลี่ย 14.6 ยอด บริเวณแคลลัสเริ่มเปลี่ยนเป็นสีเขียวเข้มและเกาะกันแน่นขึ้น เกิดรากจากกลุ่มยอดโดยเพาะเลี้ยงบนอาหารสูตร ½MS ที่เติม 1-Naphthalene acetic acid (NAA), 3-indole-butyric acid (IBA) หรือ 1-indole-acetic acid (IAA) ร่วมกับน้ำมะพร้าว 5เปอรเซ็นต์ เป็นเวลา 90 วัน พบว่ากลุ่มยอดเกิดรากได้ดีที่สุด 20 เปอร์เซ็นต์ บนอาหารสูตร ½MS ที่เติม NAA ความเข้มข้น 3.0 มิลลิกรัมต่อลิตร โดยมีจำนวน 3.0 รากต่อยอด เมื่อนำออกปลูกตามธรรมชาติมีอัตราการรอดชีวิต 100 เปอร์เซ็นต์